中华消化杂志,,39(7)
作者：姚建宁、张学秀、张延祯、李艳乐、王春峰、张连峰
摘要
目的：探讨环状RNA-波形蛋白(circ-VIM)调控结直肠癌细胞增殖和凋亡的作用及其机制。
方法：收集年12月至年12月，于医院普外科行结直肠癌根治术并经术后病理检查确诊的例结直肠癌患者的病历资料，以及其癌组织和所对应的癌旁组织(阴性对照)标本。采用实时荧光定量PCR法检测circ-VIM在结直肠癌中的表达水平。采用细胞活性检测试剂盒检测结直肠癌HCT-和HT29细胞的增殖水平。采用膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶实验检测HCT-和HT29细胞的凋亡比例。采用5，5′，6，6′-四氯-1，1′，3，3′-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物(JC-1)法检测HCT-和HT29细胞线粒体势能的变化。采用蛋白质印迹法检测蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的蛋白质表达变化。采用miRDB软件预测circ-VIM的靶miRNA。统计学分析采用t检验和卡方检验。
结果：结直肠癌组织中的circ-VIM表达水平为2.±0.，高于所对应癌旁组织中的1.±0.，差异有统计学意义(t＝23.，P0.01)。circ-VIM表达水平在不同肿瘤体积、TNM分期和有无淋巴结转移患者中差异均有统计学意义(P均0.05)。lenti-circ-VIM组HCT-和HT29细胞增殖水平分别为0.±0.和0.±0.，分别高于对照组的0.±0.和0.±0.，差异均有统计学意义(t＝20.、－15.，P均0.01)。lenti-circ-VIM-shRNA组HCT-和HT29细胞增殖水平分别为0.±0.和0.±0.，分别低于对照组，差异均有统计学意义(t＝24.、－23.，P均0.01)。lenti-circ-VIM-shRNA组HCT-和HT29细胞的凋亡比例分别为(18.00±1.82)%和(20.80±0.61)%，分别高于对照组的(6.64±2.01)%和(7.35±1.36)%，差异均有统计学意义(t＝8.、17.，P均0.01)。lenti-circ-VIM-shRNA组HCT-和HT29细胞中的JC-1聚合物和JC-1单体荧光强度比值分别为2.21±0.12和1.40±0.11，分别低于对照组的14.54±1.00和9.24±1.18，差异均有统计学意义(t＝－19.、－15.，P均0.01)，说明线粒体膜电位下降。经lenti-circ-VIM-shRNA处理后，HCT-和HT29细胞内磷酸化蛋白激酶B、磷酸化mTOR、B淋巴细胞瘤-2、线粒体细胞色素C的蛋白质表达水平均下调，胞质细胞色素C、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白、活化型半胱天冬酶3的蛋白质表达水平均上调。circ-VIM表达上调时，miRNA-b、miRNA-、miRNA-表达下调；circ-VIM表达下调时，miRNA-b、miRNA-、miRNA-表达上调。
结论：circ-VIM在结直肠癌中表达异常增高，并且参与调控结直肠癌细胞的增殖和凋亡。
结直肠癌是全球发病率居第3位的恶性肿瘤，仅次于肺癌和乳腺癌[1,2]。多数结直肠癌患者在确诊时即已处于进展期，丧失了根治性手术的机会，而且即使手术，也存在较高的复发率和转移率。研究结直肠癌发病机制对提高其早期诊断率、改善治疗效果具有重要意义。近年来，环状RNA在肿瘤中的作用备受瞩目。环状RNA是一类呈封闭环状结构的双链非编码RNA，广泛存在于生物细胞中，具有进化保守性[3]。目前，已发现多个与结直肠癌相关的环状RNA，调控多种结直肠癌细胞生物学行为[4,5]。根据其对肿瘤发生、发展的作用，可分成两类：一类属于促癌环状RNA，如在结直肠癌组织和细胞中异常高表达的环状RNACCDC66，主要发挥促癌作用，可促进细胞增殖、迁移和转移[6]；另一类属于抑癌环状RNA，如环状RNAITGA7，其在结直肠癌组织和细胞中通常表达降低，可通过抑制Ras信号通路而发挥抑制肿瘤细胞增殖和转移的作用[7]。新近发现的一个环状RNA-波形蛋白(circularRNA-vimentin，circ-VIM)在急性髓细胞性白血病中表达显著增高，并且其表达与预后显著相关，可作为急性髓细胞性白血病的诊治标志物[8]。本研究拟初步探讨circ-VIM在结直肠癌发生、发展中的作用。
材料与方法
一、材料来源