一、目的
通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉的差异，说明这些因素与酶活性的关系。
二、原理
酶在最适温度及pH条件下发挥最大的催化活性,同时酶的活性还受激活剂和抑制剂的影响。碘遇淀粉变蓝色，在反应体系中加入碘液，通过观察溶液颜色变化来判断淀粉酶水解淀粉程度，即淀粉酶活性。
三、实验步骤
1.唾液淀粉酶的制备
用蒸馏水漱口后，再含约10ml水1分钟作为唾液淀粉酶液。可根据各人唾液中淀粉酶活力差异进行适当稀释（10-50倍）。
2.温度、pH、抑制剂和激活剂对酶活力的影响
表1温度对酶活力的影响
操作项目
管号
1
2
3
唾液淀粉酶溶液(ml)
1
1
1
pH7.0磷酸缓冲液(ml)
2
2
2
温度预处理5min
0℃
37℃
70℃
1％淀粉溶液(ml)
2
2
2
现象
取3支试管标号后，按表1加入试剂，摇匀，在不同温度下保温2分钟后，每隔半分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却5min，各加1滴碘液，混匀。观察并记录各管颜色变化，解释现象。
pH和抑制剂、激活剂对酶活力的影响，按表2和表3操作即可。
表2pH对酶活力的影响
操作项目
管号
1
2
3
pH5.0磷酸缓冲液(ml)
3
0
0
pH7.0磷酸缓冲液(ml)
0
3
0
pH8.0磷酸缓冲液(ml)
1
0
3
1％淀粉溶液(ml)
1
1
1
预保温
摇匀，37℃水浴保温2min
唾液淀粉酶溶液(ml)
1
检查淀粉水解程度
摇匀，37℃继续反应。每隔半分钟从第2号管中取出1滴反应液检查反应情况。反应液不变色时，即停止反应，取出所有管，各加1滴碘液，混匀。
现象
表3抑制剂和激活剂对酶活力的影响
操作项目
管号
1
2
3
4
1％NaCl(ml)
1
0
0
0
1%CuSO4(ml)
0
1
0
0
1%Na2SO4
0
0
1
0
蒸馏水(ml)
0
0
0
1
唾液淀粉酶溶液(ml)
1
1
1
1
0.1％淀粉溶液(ml)
3
3
3
3
检查淀粉水解程度
摇匀，置37℃水浴中反应1min后，开始用碘液检查1号管淀粉的水解程度。待1号管反应液不再变色，即停止反应，取出所有管，各加1滴碘液，混匀。
现象
四、实验结果分析
1、解释观察到的现象。
2、为什么在实验1和2中用2号管检测反应情况？
3、实验3中淀粉酶的抑制剂和激活剂是什么？
五、注意事项
加样及观察记录顺序，加酶液及底物时要尽快操作完成。
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