基本信息:
目前实验中心平台的多功能酶标仪可实现的检测技术(划重点):
光吸收读数功能参数
荧光强度读数功能参数
化学发光功能参数
一堆参数看不懂?!没关系,下边我们说点干货。
酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附实验的专用仪器又称微孔板检测仪。显而易见,微孔板是酶标仪检测的媒介。
微孔板(Microplate)是一块上面排列有多个孔的板,每个孔可作为一个微型试管,它已成为分析研究和临床诊断实验室的标准化工具。
根据孔数可分为:6孔、12孔、24孔、48孔、96孔、孔等
根据用途可分为:透明、白色、黑色、底透白板、底透黑板、带盖板、UV板、石英板
特点:通量高,可设置复孔;小体积检测,节约试剂;应用范围广。
那么,这些微孔板在我们前边提到的3大检测技术中是如何应用的呢?
光吸收
即分光光度检测,是利用物质分子所特有的吸收光谱而对物质进行定性定量测定的检测技术,也就是我们熟知的OD值。可检测的光波长范围可从紫外光(~nm)到可见光(~nm)、红外光(~nm)。
吸收导致光经过待测液体后光强减弱,光强的减弱程度即为待测样品的吸光值(OD),光吸收值与液体浓度成正比。
检测光吸收时一般选用透明板或底透黑/白板等,保证光路顺利通过待测液体。
?光吸收技术的应用
√核酸和蛋白质定量
√ELISA(酶联免疫检测)
√细胞活性分析
√酶活性分析
√内毒素测定,IC50,ID50
√细菌生长检测
√光谱扫描实验
光吸收应用之ELISA
常见ELISA试剂盒的反应原理如下图所示:
△碱性磷酸酶(AP)
常用底物PNPP
检测波长:nm
特点:本底低,灵敏度高,较昂贵
△辣根过氧化物酶(HRP)
底物:ABTS/nm
OPDnm
TMBnm
特点:常用,灵敏度不如AP系统
加入相应底物反应后即可在酶标仪上进行特定波长的吸光度检测。
光吸收应用之细胞活性分析(MTT法)
MTT是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶。formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠(pH4.7)的溶液中溶解,用酶标仪测定nm处的光密度OD值,以反映出活细胞数目。
好了,今天就先介绍光吸收检测的应用吧,荧光技术和化学发光技术的应用后续再一一介绍。
更多应用,等你来探索。。。(未完待续ing......)
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