实验原理
BCA(bicinchoninicacid)是一种稳定的水溶性复合物，在碱性条件下，二价铜离子可以被蛋白质还原成一价铜离子，一价铜离子可以和BCA相互作用，两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的络合物，该复合物为水溶性，在nm处显示强吸光性，在一定浓度范围内，吸光度与蛋白质含量呈良好的线性关系，制作标准曲线，因此可以根据待测蛋白在nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。
实验准备
1.BCA定量试剂盒：含A液和B液
A液：BCA碱性溶液（配方：1%BCA二钠盐，0.4%氢氧化钠，0.16%酒石酸钠，2%无水碳酸钠，0.95%碳酸氢钠，这些液体混合后再调PH至11.25）
B液：4%硫酸铜
2.牛蛋白血清（BSA）
3.待测的蛋白样品
实验步骤
配置BCA工作液：将A液和B液摇晃混匀，按照A:B=50:1的比例配置BCA工作液，充分混匀。（BCA工作液室温下24h内稳定，故现用现配）
配置不同浓度的标准蛋白液（BSA），1ug/ul，2.5ug/ul，5ug/ul，7.5ug/ul，10ug/ul，待测蛋白样品在什么溶液中，就用该溶液来稀释标准蛋白液（如待测样品溶于强RIPA裂解液，则用强RIPA裂解液来稀释标准蛋白液）。
取空白组（0ug/ulBSA）各浓度的标准蛋白液5ul加入96孔板中，另取待测的蛋白样品5ul，加入96孔板。
PS：上图加样的量仅作为参考，蛋白液和BCA工作液的比例符合即可。
向各孔的蛋白液中加入ul的BCA工作液，混匀，37度放置30分钟，（加样时应当动作轻柔，防止产生气泡影响读数）。PS：温度和放置时间可以调整，可在60度放置30分钟or室温放置2小时。
静置结束后，冷却至室温，用酶标仪测定nm出的吸光度，并制作标准曲线。
根据待测样品的吸光度，比对标准曲线，计算蛋白的浓度。
注意事项
BCA法测定蛋白浓度时，吸光度可随时间的延长不断加深，且显色反应会随温度升高而加快，故如果浓度较低，适合较高温度孵育or延长孵育时间。
标准蛋白液的加量应当准确，如果加量不准确，会导致制作出来的标准曲线出现偏差，影响待测样品的浓度计算，所以一方面需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液，另一方面应使用精确度高的移液枪。
A液和B液混合可能出现浑浊，此时应成分振荡混匀，最后可见透明溶液。
为加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但切勿过热。
当结果出现空白组本身就有较高的背景，可用Bradford法重新测定蛋白浓度。
优缺点优点：
测定快速简便，45分钟内完成
准确灵敏,检测浓度为5-mg/ml
干扰物质少，BCA法不受大部分样品中的去垢剂等化学物质影响，可兼容样品中高达5%的SDS，5%TritonX-,5%的Tween20
在一定浓度范围内，有良好的线性关系
检测不同蛋白质分子的变异系数小于考马斯亮蓝法蛋白定量
缺点：
与荧光蛋白质定量等方法相比，属于化学呈色法的BCA法检测灵敏度尚不够
蔗糖、尿素、NH4+和EDTA影响测定结果
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