酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA）是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）--待测抗体（抗原）--酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
目前ELISA法应用1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研究抗酶抗体的合成。
3、显现微量的免疫沉淀反应。
4、定量检测体液中抗原或抗体成份。
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ELISA实验疑难问题解答信号强度增长不充分
问题
解决方案
底物准备有误
确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完全，充分混合并在一定的期限内使用。
每孔底物添加体积有误
保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。使用同一种移液器吸取方式。
孵育时间或温度有误
严格按照推荐的孵育时间和温度进行实验。避免在环境条件变化的位置孵育96孔板（如放置在通风处或窗台边）。严格控制孵育时间，避免孵育时间过长或过短。
偶联物或底物准备有误
确保混合相同体积的偶联物和底物。加入后会立即显色。底物在使用前应避光保存。
仪器设置不正确
确保酶标仪使用了正确的滤光片。确保按照说明书，正确的配置仪器参数。
非正常的样本值
问题
解决方案
不正确的收集或保存
确保正确的底物体积并混合。如果底物是冻干粉，用相应缓冲液重悬完全，充分混合并在一定的期限内使用。
不正确的样本制备
说明书中样本制备方法已经过性能测试验证，严格按照说明书推荐进行样本制备。确保使用正确的校正稀释液。
边缘效应
问题
解决方案
工作台温度不均衡
避免在环境条件变化的位置孵育96孔板（如放置在通风处或窗台边）。
体系液体蒸发
保证移液器正常工作，必要时进行重新校正。保证移液器吸头连接紧密。使用同一种移液器吸取方式。
叠板
孵育时避免叠板。
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