细胞实验技术交流之细胞传代
细胞培养三个过程中，细胞传代培养是必不可少的一个过程，也是整个实验中最容易出现问题的一个步骤。
它是指需要将培养物切割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养的过程。对于常规培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
当原代培养成功之后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一方面细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
细胞传代操作流程1将复苏好在培养瓶（皿）中的细胞（贴壁细胞），用移液器吸走培养基，加入适量PBS洗1-2遍，每次清洗时轻轻晃动培养瓶（皿）；
（1）悬浮细胞
大多数情况下采用离心法传代，rpm/min,5min后去上清。沉淀细胞加新培养液后再混匀传代。（直接传代法：即悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2-1/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代，此过程相较于其他细胞损失量较大，一般不建议使用）
（2）半贴壁细胞
此类细胞呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来，进行传代
（3）贴壁细胞
采用xiaohuafa酶消化法传代，常用的消化液有0.25%的胰蛋白酶液。
2加入适量胰酶，置于培养箱中消化2min左右；
3在显微镜下观察细胞状态的改变，待细胞逐渐变圆后加入适量血清或完全培养基终止消化，-rpm离心3-5min;
4将上清去除，加入适量完全培养基重悬后，按照自己需要的比例（一般1:2）转移到培养瓶（皿），置于37℃培养箱继续培养；
传代结果判定
判断细胞传代成功与否，需要看细胞传代后细胞的贴壁率和细胞的增殖率以及污染情况，若传代后95%以上的细胞贴壁，细胞的活性好且增殖速率正常，这就说明细胞传代成功。
注意事项
1
吸走原培养基时尽量吸尽，用PBS漂洗时也是，此步骤的目的是尽量减少培养基中血清对胰酶消化时的影响；
2
加入胰酶量要根据培养皿规格和细胞量决定，通常以刚没过细胞为宜；
3
消化时间需要同时考虑到细胞本身的特性，细胞密度，胰酶浓度等多方面因素，灵活调整，切记生搬硬套；
4
通常细胞消化到其刚好不贴壁时终止最好，如果消化不到位，靠外力强行吹下来，则细胞膜很容易被撕裂，导致传代后出现细胞碎片和死细胞，如果消化过度，则细胞膜通透性会发生改变，导致传代后出现凋亡细胞；
5
部分对离心敏感的细胞（主要是原代细胞），可以加入胰酶后室温放置30s左右，然后吸去大部分胰酶，再放培养箱消化，消化到位后直接加入足量完全培养基终止消化，待其贴壁后再换液去掉残余胰酶；
6
传代过程中加入任何实际都应该轻柔缓慢的加到皿壁，切记直接加到细胞面上，如果细胞本身贴壁能力较差，可能导致细胞凋亡；
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