广州都市报

您现在的位置:  > 酶标志 > 一文解锁全能核酸酶多样化应用场景

一文解锁全能核酸酶多样化应用场景

发布时间:2024/5/31 9:02:43   点击数:
全能核酸酶,又称非限制性核酸内切酶,是一种来源于SerratiaMarcescen的非特异性核酸内切酶,可以降解各种形式的(双链,单链,线状,环状,天然或变性)DNA和RNA,产生-5个碱基长度的5-单磷酸寡核苷酸。无论是实验研究,还是工业生产,全能核酸酶都是目前唯一能够同时有效去除DNA和RNA的酶。

一,广阔的应用前景

1,降低细胞/细菌裂解时核酸释放产生的黏度,并且适用于任何裂解方式。

2,在大规模的层析纯化时,避免由于大量的核酸吸附在层析介质上降低蛋白质的有效载量从而降低纯化得率。

,在ELISA、二维电泳和免疫印迹分析中,提高分辨率和回收率,这对于准确、高效地分析生物样品至关重要。

4,消除重组蛋白、疫苗等生物制品的外源性核酸残留,这是确保产品安全、有效的关键步骤。

二,全能核酸酶的应用

1,E.coli表达的重组蛋白纯化

对于某些大肠杆菌表达的蛋白,很容易形成包涵体,在纯化的过程中常常与宿主DNA缠绕在一起,破碎的菌体往往非常粘稠,大大降低了蛋白的纯化效率。通过琼脂糖凝胶电泳可以发现,宿主DNA确实会与蛋白结合,并在一定程度上限制了全能核酸酶的消化。通过延长全能核酸酶的处理时间或增加用量,可以有效去除结合的宿主DNA。

图1.1-5:经过全能核酸酶不同时长处理的样品,处理时间越长,效果越好

2,Western-blot实验中的应用

W-B实验常常用于研究蛋白质间的相互作用,当我们在研究细胞中蛋白互作网络时,提取的蛋白样本中往往含有大量核酸,使得研究者难以分辨这种互作关系是蛋白-蛋白之间形成的,还是由DNA的桥接间接导致的。同时,核酸的存在也会导致实验结果条带不清晰、背景较杂。

用全能核酸酶预处理样品,一方面可以避免这种DNA的桥接作用的影响,另一方面可以减少背景杂质。

图2.+:用全能核酸酶预处理样品,—:未使用全能核酸酶处理的样本

,CHIP-seq实验中的应用

衰老的发生与大量染色质变化同时发生,这很有可能就是衰老的原因。目前,研究这类变化的首选方法是染色质免疫沉淀,然后进行测序(ChIP-Seq)。早期常用的方法是甲醛处理细胞,再通过超声处理产生到00bp之间的染色质片段来完成的。但是通过这种方式得到的DNA量太少,不足以用于测序。使用全能核酸酶消化DNA和RNA,可以轻松地从衰老细胞中分离染色质。全能核酸酶不具有蛋白酶活性,可以轻易获得足够的DNA并进行测序。

图.20分钟内RKO细胞中全能核酸酶对染色质消化的比较

4,PBMC细胞结团

近年来,冷冻保存的外周血单核细胞(PBMC)在免疫分析中的应用急剧增加。冷冻保存的PBMC在终点频率较低的临床试验中特别有用,因为可以在研究结束后进行免疫分析。此外,使用冷冻保存的PBMC可以在一个实验室中进行所有检测,消除了实验室间变异性,使用冷冻PBMC还可以消除批间变异的影响。

除了解决储存条件的问题以外,PBMC细胞最大的特性是在复苏后极易结团,容易导致细胞质量低,检测结果不可信。在细胞复苏的时候将全能核酸酶加入到培养基中和细胞共培养,可以有效防止细胞结团。

图4.未经全能核酸酶处理的过夜储存血液的斑点计数结果显示,四个供体有三个显著减少,用全能核酸酶处理的过夜血液PBMC的SFC结果更接近于从新鲜血液中分离的细胞获得的结果

三,逐典Pannarase全能核酸酶优势:

1.无动物源性、无氨苄青霉素

2.杰出单位比酶活、更高效的核酸降解能力

.先进的生产工艺,非传统His标签纯化、排除引入金属离子风险

4.严格的质控标准,内毒水平低,确保单位酶活的准确性以及批次间稳定性

1,全能核酸酶应用条件:

全能核酸酶的酶活会受到多种因素的影响(例如温度、pH、离子强度等),故用量范围也会从0.1U/mL-U/mL不等。因此,不同的操作环境下酶的最佳浓度不同,需要通过实验设置梯度进行最佳条件的摸索。

2,应用实例:

1.样品:狂犬病毒浓缩液

处理条件:核酸酶浓度50~90U/ml,

7℃处理2h,转入18~26℃处理6h

表1.不同酶浓度对狂犬病病毒收获液中Vero细胞DNA的去除效果【11

2.样品:狂犬病病毒浓缩液

处理条件:25、50和U/ml,7℃

表2.不同浓度核酸酶作用不同时间去除Vero细胞DNA效果的比较【2]

.样品:流感病毒浓缩液

处理条件:10U/mL,7℃

表.核酸酶处理00k超滤浓缩效果(x±s,n=)【]



转载请注明:http://www.hongminqing.com/mbz/11269.html

网站简介 | 发布优势 | 服务条款 | 隐私保护 | 广告合作 | 合作伙伴 | 版权申明 | 网站地图

当前时间: