1：朗伯-比尔定律（以下简称L-B定律）
首先，生化仪的主要基本原理之一是朗伯-比尔定律，这个大家应该都听过名字，
有些人会对各种公式之类的头疼，不过入门的话，只要对一般的性质了解就行了，公式说明啥的完全可以不管啦。
朗伯-比尔定律实际上就是说：如果有一种物质有颜色，那颜色越深，吸光度就越高，物质的含量就越多。（而且两者成线性的正比，这样两者的关系就是一条直线，可以用来计算）
当然直线只在浓度不太高的时候成立，浓度太高就会不再是直线，不过对于我们普通生化试剂来说，这个方面的问题一般可以不考虑，大部分情况下一般达不到这个浓度。
其实就一句话：吸光度和物质浓度成线性关系！
2：生化反应的原理和方法
生化反应曲线如果看不懂，可以先从原理和最简单的反应开始入手，比如总蛋白：
先是反应原理：Cu2+(蓝色)+-CO-NH-(蛋白质的肽键)=络合物(紫色)
根据第1点里的说明，很明显紫色的深度（吸光度）和络合物的含量成正比，而络合物怎么来的？铜和蛋白反应来的。
只要铜离子足够，就能将所有的蛋白全部络合。所以络合物的浓度=蛋白质的浓度。
这个时候看一下一般的反应曲线：
我们能看出来，一开始（加完样本和R1之后）吸光度基本是稳定的一条水平线，
加入试剂开始反应后，颜色浓度（吸光度）开始上升，上升到一定程度后，颜色基本不再加深，说明反应完了。理论上可以认为待测的蛋白全部络合并显色。
根据上面看到的，一开始的吸光度是87，反应后的吸光度是，我们目前可以认为，样本中的蛋白质参加反应后，让吸光度升高了-87=。
这时候的吸光度，反映了有色物质（络合物）的浓度，
而络合物的浓度，又反映了待测物质的浓度（总蛋白），
这样就建立起了一个“吸光度-络合物浓度-总蛋白浓度”之间的关系。
且“吸光度-络合物浓度”根据L-B定律，成线性正比，
而“络合物浓度-总蛋白浓度”根据反应方程，两者浓度相同（总蛋白全部转变为络合物）。这样关系其实也就是：
“总蛋白浓度”=“络合物浓度”正比于“络合物吸光度”。
所以在反应后的吸光度上升程度和总蛋白的浓度成正比，上升的越多，总蛋白浓度越高。
我们计算时，也只需要最后的吸光度，至于上升过程中的曲线形态，其实在一定程度上可以不管，因为在原理方面，它的反应是将所有的待测物质转变为显色物质，只要能全部转变，不管反应的是快是慢，最终形成的吸光度结果都一样。
上面这种将待测物质全部转变为显色物质的反应，都是让反应进行的到终点的，所以这种方法的名字就叫“终点法”。
其主要特点就是：反应到终点，待测物质全部转变为显色物质，吸光度不再变化。
但还有些时候，待测物质浓度比较高，结果试剂耗完了（比如说蛋白浓度太高，把铜结合完了还有剩余的），这也到了终点，但这时的终点就不再是待测物质的终点了，因为蛋白还有剩的。
这种就是试剂耗尽，换句话来说，比如我知道现在试剂里铜离子浓度是Amol/l，最大显色程度是Abs。那如果检测的吸光度整体在以下，我都可以认为是反应的终点没问题，蛋白都消耗光了，如果接近或达到达到，我就可以认为反应不一定充分，也许是试剂消耗的差不多了，则结果可能并不准确。
这就是终点法中的吸光度限制：吸光度达到一定程度之后，仪器会出现警报，说明检测结果可能有异常。
3：另一类物质
上面就是一般的代谢物等生化项目出结果的过程，都是待测物质通过某些反应与显色物质的浓度挂上钩。但是人体内还有一类比较特殊的玩意儿：酶
我想大家应该都知道，酶是催化反应的，反应前和反应后又不变，那反应起来的话，无论你加了多少底物，理论上反应起来都可以耗光，底物耗光之后，显色物质的浓度都一样，没办法区分，那该怎么检测呢？
这时候人们发现，酶的量和催化效率有一定的关系，如果酶越多，单位时间内能催化反应的底物越多，也就是反应的速度越快。（当然这其实也和酶的活性有关，所以现在我们使用的单位一般是酶活度单位U/L，而不是和一般生化一样用g/L或mmol/L）
所以这时候，就是让酶催化一个显色反应，并产生显色物质，再通过生化仪检测显色物质生成的速度，看反应的过程有多快，反应的越快，对应的酶的活性就越高。
所以对应的反应曲线一般是这样的：
可以看到，在实际反应开始后，吸光度呈直线上升，而如果酶的浓度或活性越高，单位时间（检测范围）内的上升程度就越高，上升速度就越快。
这时候仪器就可以通过检测吸光度的变化速度来判断反应的速度，反应速度又与酶的活性成正比。也就是
“酶含量”正比于“反应速度”=“显色物质生成速度”
而和终点法的试剂耗尽相对的，如果酶的活性过高，让试剂里的底物在达到预设读点区间时就反应完生成显色物质了，那在正式读点的区间就会出现无法升高的吸光度横线，从而得出错误的结果。
不过因为酶催化的是底物，这种“速率法”里的“试剂耗尽”就被称为底物耗尽了。就像下面
上图就是酶活性过高，在加R2之后的预反应阶段内就把试剂反应完了，正式读点的时候是一条水平直线，结果反而是负数；
因为耗尽了所有的试剂，所以前面会有一个非常大的上升或下降幅度，如上图就从接近直接降到了近，吸光度下降程度接近（具体数值与仪器、试剂、参数设置均有关系）
据此某些厂家还提出了一个“读点提前”的计算方式，在这种情况下将读点区域和范围提前，用反应线性期的斜率进行结果计算。但因为设置和判断复杂，暂时用的人不多
4：结果的计算
大家还有没有发现，上面一直说的是各种“正比”之类的东西，吸光度之类的是光的强度，而总蛋白浓度是物质的量（g/L），虽然他们之间有关系，但这又不像1kg=g，光和物质量之间怎么换算呢？
这时候就轮到“标准品”上场了，标准品作为一个标准，它本身的待测物质的值是确定的，然后将标准品上机进行检测，得到标准品的吸光度：
而根据一般的L-B定律，浓度和吸光度的关系都是呈直线的，所以只要两个标准品，分别测一下吸光度，就能在“浓度-吸光度”的坐标系中确定两个点，并画出一条直线了。
之后做的所有普通标本，都可以在这条线上找到样本吸光度所对应的结果。这就是所谓的定标。定标得出的标准曲线是用于计算常规样本的结果的。
虽然L-B定律是线性的，但有些项目的反应程度不是线性的，像部分抗原抗体反应，浓度和反应程度的关系是曲线，那到时候就需要更多的点（和拟合方式有关，一般5-6个点），并用曲线来讲这些点连在一起。
仪器中常见的拟合方式有:
点到点拟合：每两个点之间用直线链接起来，一般多用于多个点拟合，就是一条折线
直线拟合：两点确定一条直线（两点）或用直线回归拟合（多个点）
四参数拟合：免疫类常用的曲线拟合方式，可以拟合的形状趋势较多，公式共有4个参数。
样条拟合（Spline）：和点到点类似，不过点到点之间链接的不是直线，而是二次/三次曲线，并通过一定的算法将其平滑化（所以一般无法看到此种定标方式的定标参数，因为并不是一个方程连起来的）
5：反应方法：
实际上可以说本质上生化就这两种方法：终点法和速率法
至于生化仪中其他的像什么所谓的1点法，2点法，平均点法，平均速率法等等，都只是这两种原理的衍生方法而已，本质上没有区别。
一般生化仪常见的几种方法：
（终点法）1点法：（一般在反应完成后）选取一个点的吸光度数值作为终点吸光度，是基本方法之一，也用于有些不太适合扣空白扣除的项目（如部分血脂项目，血脂高时可能有浑浊吸光，反应后脂质消耗浊度下降，具体请依照说明书）
（终点法）2点法：在正式反应前（一般加过样本和R1）选择一点，反应完成后再选择一点，计算吸光度升高的程度。可以扣除部分试剂空白，样本空白等一系列影响因素，是一般情况下最常用的终点法。
（速率法）平均速率法：在正式反应时选择一个可靠的线性期区间，计算区间内的平均速度
（速率法）2点速率法：只选择开头和结尾的两点，用两点来计算速度的大小。
6：两种方法的对立和统一
上面说了终点法和速率法各自的特点，但是我们现在一般生化使用的都是全自动生化仪，而全自动生化仪的最大特点就是固定化和程序化。
这种情况下，你也许会发现：
如果选终点法，是读一个固定时间段内的吸光度变化
如果选速率法，是读一个固定时间段内的吸光度变化率
如果一个终点法的吸光度变化高，那它的速率肯定也快
如果一个速率法的吸光度变化快，那它的终点肯定也高
这时候，你看两者是不是很像？
所以有时候，你会看到某些实验室的仪器参数都设错了，但是他们可能还会说：“我们结果做的很好”“我们的结果很稳定”“我们通过了质评”……
这也很正常，就算有时候你误把两点终点设成了两点速率，一般也能得出结果，有时候两者也差不多。
那是不是意味着两者在仪器上没什么区别了？当然不是
两者在一开始的理念上差别很大，只是在全自动仪器的加持下有了一定的统一。
但因此，两者在用于计算时的数字就不一样，像终点法一般是直接用1到2个点的吸光度就可以计算的，而速率法（特别是平均速率法）则用于计算的点会多很多，还要算斜率，定标曲线就会和你用终点法算的不一样。
仪器针对这两种方式的报警提示一般也有不同，而且对于一般的终点法项目，如果反应曲线的形状不直，误选平均速率法会无法算出一个稳定的斜率，如果误选两点速率法，有可能结果会相对好一些。
而且方法选错的话，对于一些异常或特殊的标本，会让反应曲线特点和普通标本有差异，从而导致结果出现差异。
但不管仪器怎么算，对于每个项目的检测方式，自己心里应该清楚，最起码如果弄清了原理，在遇到异常曲线的时候，不至于完全一头雾水。
一个例子：异常的ALT-AST曲线
仪器出现异常报警如下：（Lin一般意味着监测的反应曲线有异常）
ALT曲线如下所示
AST曲线如下所示
（两项目情况类似，下面仅介绍ALT的情况）
初步看来，仅一开始有一个下弯的反应过程，在监测范围内的反应曲线形态基本良好
上图为直线区域放大（调节吸光度比例尺）：
可以看到读点起始区域的线性异常（与后面的点不在同一条直线上）因此报警
也就是一开始的那部分是延续前面的弯曲下降。
这个曲线可以分成两个部分，一是加入试剂后的指数下降形式，二是后面的直线下降形式
直线下降形式在速率法里说了一点，在这里我们再深入说明一下：
1：酶可以催化底物反应，并且如果底物的浓度足够高的话，酶会催化不过来（反应会达到一个稳定的最大速度）
所以在检测酶的浓度的时候，就是检测这个稳定的最大速度。
所以，正常的酶类项目的反应曲线是一条上升或下降的直线。
因为酶催化的专一性（只催化一种或一类反应），且因为底物浓度足够，才能让反应呈一条直线。
2：如果是普通的终点显色反应（如总蛋白），则是将待测物质转化为显色物质。
反应开始后，待测物质和对应的试剂发生反应，两者的浓度都会下降，
浓度下降后，反应的速度也会下降（这里就没有“催化不过来”的问题了），
所以一般来说，随着反应程度的上升，反应的速度会逐步下降，这是看到的就是一条曲线了。
其次还有像很多目前检测的项目，并不是检测化学上完全均一的物质，
像总蛋白里有分子量相对较大和较小的各种蛋白；
直接胆红素里还有单葡萄糖醛酸、双葡萄糖醛酸和δ胆红素之类的，
这时候，不同物质在参加反应时的基础速率也是不一样的，结合起来之后也会表现为曲线。
所以上面的反应曲线里，直线部分可以认为是正常的酶促反应过程，
而前面的弯曲反应曲线是应该排除的预反应过程。
双试剂的ALT/AST有时会见到这种弯曲的预反应过程，
一般是因为血清中有些干扰物质和试剂里的NADH反应了，导致吸光度下降，
当血清中的干扰物质被试剂反应完后，后面参加反应的就是ALT/AST了，
这时候反应过程就是直线，而且因为干扰物质已经耗尽，所以不会对结果造成影响
上图的反应过程中就是血清中干扰物质较多，在设定的读点区域依然没有反应完，
导致读点区前部出现曲线，并报警“线性异常”
一般的处理方法：
一般情况下就是用这个样本做回收实验，如果有明显异常的话，基本上说明结果肯定有问题
但是如果结果基本符合，并不一定说明结果没有问题，还要参考曲线、病情、用药等一系列信息。
例子中的的这个样本因为我看曲线认为结果偏移应该不大，所以只做了一个高低混合
样本2的ALT可以认为是，AST是.5
这样反推样本1的ALT=x2–=22；AST=x2–.5=22.5
不过这个一般仅做参考，如果结果相差不大的话一般尽量请发布仪器原始结果。
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