——抑菌剂对致病菌ROS产生的影响
“抑菌剂对致病菌ROS产生的影响实验研讨会”于年3月20日在A会议室如期开展。本次研讨会由罗琨瑶硕士主讲，赵鹏瑜、白向阳同学辅讲，团队内成员对此研讨会充满热情，积极报名参与。
在研讨会开始，由白向阳同学为大家介绍ROS的实验原理。
活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS）是一种由氧衍生而来的生物活性分子，是细胞代谢的正常产物。在活性氧水平较低时，ROS作为“氧化还原信使”参与细胞内的信号传递和调节。然而，在环境压力（例如电离辐射、热暴露、免疫反应、缺氧、营养不足）期间，ROS水平会急剧增加，这可能会造成DNA损伤，抑制基因表达，导致蛋白质错误折叠甚至影响蛋白质合成，对细胞结构造成严重损害，这被称为氧化应激。
ROS水平一旦超过内源性抗氧化防御的能力，就会进一步导致DNA、脂质、蛋白质的损伤，最终导致细胞死亡。因此，ROS水平是细胞正常生理功能和环境因素导致细胞损伤的重要信号。细胞膜作为天然产物抑菌作用的重要靶点之一，检测天然产物作用后细胞内的ROS水平对于理解天然产物的抑菌机制具有重要作用。
活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
罗琨瑶同学以“牛至精油对创伤弧菌ROS水平的影响”为例，从处理菌液、配置药液、装载探针、清洗探针、检测荧光强度、测量活菌量以及数据处理等方面为大家详细介绍了实验步骤。
接下来由赵鹏瑜同学为大家强调了在实验中的需要注意的事项。首先不可以选择作用时间内抑杀菌体的浓度，因此，需要学会如何利用在PBS中的time-kill曲线选择合适的组别与时间。其次探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高，并且强调在使用PBS清洗过程中需小心吸走上清液，枪头不要碰到管壁或者管底，以免造成菌量的损失。接下来提醒同学们尽量缩短探针装载后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差，并为大家详细讲述了C酶标仪的使用方法。最后为同学们解释了三种可能出现的实验结果的原因及对应修改措施。
最后罗琨瑶同学总结了实验过程中的心得体会，她说：“虽然抑菌剂对致病菌的抑制的研究我们实验室有一套成熟的研究方法，对实验具体操作也很有经验。但是我们仍然要阅读大量的文章，
