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酶的应用基础知识讲义

发布时间:2018-8-31 10:33:26   点击数:

实验4果汁中的果胶和果胶酶

1.果胶是植物细胞壁的主要成分,由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成,化学本质是多糖。果胶起着将植物细胞粘合在一起的作用,去掉果胶,植株组织将变得松散。

2.果胶可结合大量的水,降低组织的分散性,故果胶是一种很好的凝固剂,用煮沸的山楂泥制作山楂糕,就是利用果胶的作用。

3.果胶不溶于乙醇(常用浓度为95%),这是鉴别果胶的一种简易方法。

4.果胶酶和果胶甲酯酶可水解果胶,可利用黑曲霉、苹果青霉等微生物来生产这些酶。

5.果胶水解的最终产物是半乳糖醛酸。制备果汁时果胶酶、果胶甲酯酶两种酶均需使用,原因是这样才能将果胶完全水解为半乳糖醛酸,增加组织的分散性,有利于果汁澄清。

6.果胶酶水解半乳糖醛酸间的共价键;果胶甲酯水解酶水解半乳糖醛酸甲酯键。

7.果汁中含有的果胶会减少水果组织的分散性,制作果汁时使用果胶酶可以将细胞离析,增加固形物的分撒度,提高果汁的出汁率和澄清度,作用效果与酶的活性高低成正相关。

8.制备水果匀浆时除去果实中带种子的部分,目的是减少渣滓的产生,避免种子中的某些成分进入果汁影响口感、健康等。

9.在匀浆中加入黑曲霉提取液或果胶酶溶液后间歇搅拌20-30min,目的是使果胶酶与果胶充分接触,以利于反应的进行。

10.实验现象:(争议太多,专家给出标答前,苗老师还是不误导了)

11.品质好的果汁应该是:尽量保留水果中的营养成分;具有水果的原始口味和色彩;有更多的固形物;分散程度较好,不沉淀,不上浮;除去所有的机械组织,更易消化。因此,能使最多的水果成分溶解或分散在果汁中的条件就是制作果汁的最佳条件。

12.果胶酶除了用以制备果汁外,还用于果酒澄清、洗衣粉的添加剂等。

实验6α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

1.固定化酶(固相酶)是将水溶性的酶用物理或化学方法固定在某种介质上,使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。

2.固定化酶的方法有吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。

3.本实验是用吸附法将α-淀粉酶固定在石英砂上。具体操作方法:在烧杯中将5mgα-淀粉酶溶于4mL蒸馏水中。由于酶不纯,可能会有些不溶物。再加5g石英砂,不时搅拌,30min后装柱。然后用10倍体积的蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1mL/min。

4.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶:在试管中加入1mL可溶性淀粉溶液,再加几滴流出液,一段时间后加1-2滴KI-I2指示剂,若仍显蓝色,则证明流出液中没有淀粉酶。

5.本实验α-淀粉酶来自枯草杆菌,其最适PH为5.5-7.5,最适温度为50-75℃。

6.本实验中的淀粉指示剂是KI-I2溶液,遇淀粉显示蓝色,遇糊精显示红色。

7.实验操作流程:

(1)将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使之以0.3mL/min的流速过柱。流速控制缓慢的原因是使淀粉与酶充分接触,利于反应进行。

(2)在流出5mL淀粉溶液后接收0.5mL流出液,加入1-2滴KI-I2溶液,观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色(见教材图10)。实验现象:亲和层析洗脱液加淀粉指示剂显红色;而用于对照的淀粉溶液加指示剂则显蓝色。

(3)实验后,用10倍柱体积蒸馏水洗涤此柱,洗涤的目的是洗去残留的底物和产物。然后放置在4℃冰箱中保存,几天后再重复实验。

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苗老师

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