酸性蛋白酶（ACP）活性检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/24样
产品简介：
ACP是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。酸性条件下，ACP催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；钨蓝在nm有特征吸收峰，通过测定其吸光度增加，来计算ACP活性。注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。产品组成：
溶液的配制：
1.试剂一：临用前加入10mL蒸馏水，充分溶解；2.试剂二：临用前加入10mL提取液，沸水浴中搅拌溶解；3.标准品：20μmol/mL标准酪氨酸。需自备的仪器和用品：
研钵/匀浆器、台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、1.5mLEP管、冰、蒸馏水。操作步骤：
一、样本处理：
称约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨，rpm4℃离心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待测。或直接称取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待测。二、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到nm，蒸馏水调零。2.试剂一、试剂二和试剂三置于30℃水浴保温30min以上。3.标准溶液的配制：临用前将20μmol/mL标准液用蒸馏水稀释80倍至0.25μmol/mL标准溶液使用，现用现配。4.样本测定（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）取1mL于1mL玻璃比色皿中，在nm测定光吸收，分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。三、ACP活性计算：
1.按蛋白浓度计算酶活性单位（U）定义：30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1μmol酪氨酸ACP酶活（U/mgprot）=C标准品×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）×V1÷（Cpr×V2）÷T=0.×（A测定管－A对照管）÷（A标准管－A空白管）÷Cpr2.按样本质量计算酶活单位定义：30℃每克样本每分钟催化水解产生1μmol酪氨酸为一个酶活单位。ACP酶活（U/g质量）=C标准品×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）×V1÷（W×V2÷V3）÷T=0.×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷WC标准品：0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液；Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V1：酶促反应总体积，0.5mL；V2：加入反应体系中粗酶液体积，0.1mL；V3：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min。
注意事项：
若反应较弱，即（A测定管-A对照管）差值较小，可适当延长反应时间（20-30min），即第一步水浴时间，最后计算酶活时对公式进行修改。
实验实例：
1.取0.1g小鼠肝脏加入1mL提取液冰上充分研磨，rpm4℃离心10min，取上清，置冰上，之后按照测定步骤操作，测得计算A测定管=0.，A对照管=0.，A标准管=0.39，A空白管=0.，按样本质量计算酶活得：ACP活性（U/g质量）=0.×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷W=0.U/g质量。