小鼠ELISA试剂盒通常包含以下成分:
小鼠专用抗原或抗体:这是与小鼠特定蛋白结合的抗原或抗体。抗原会被涂在微孔板上,而抗体则通常是标记着酶的二抗,用于检测待测物质的存在。
标准曲线:标准曲线是一系列已知浓度的样品,可用于定量测量待测物质的浓度。这些样品通常是经过稀释的小鼠血清或纯化的蛋白样品,可以添加到微孔板上,并使用不同浓度的抗体进行检测。
二抗:与第一抗体结合并标记着酶的二抗,用于检测待测物质的存在和浓度。这些二抗通常来自兔子或羊,经过对小鼠IgG进行特异性识别和结合后制备而成。
酶反应物:酶反应物通常是一种染色剂或荧光剂,用于产生颜色或荧光信号以检测待测物质的存在和浓度。常用的酶反应物是辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)。
洗涤缓冲液:用于清洗微孔板的缓冲液,去除未与抗体或酶反应物结合的任何物质。
底物:用于检测待测物质的存在。根据所使用的酶反应物不同,底物也会有所不同。常用底物包括TMB(3,3,5,5-四甲基苯胺-2,2-联萘酚)和pNPP(对硝基苯磷酸盐)等。
小鼠ELISA试剂盒注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。