实验一淀粉酶产生菌的筛选
实验目的:掌握选择性筛选菌种的基本实验流程及实验注意问题。
实验原理:淀粉酶产生菌的筛选是选择性筛选微生物的代表性实验。通过配制淀粉酶产生菌培养基,对采集样品进行预处理,通过梯度稀释完成样品悬液的预处理,并进行微生物的培养。选用显色法(淀粉被降解为葡萄糖,葡萄糖与碘液反应不会形成蓝色化合物)及分光光度计法筛选淀粉酶产生菌。同时,对初步筛选微生物完成淀粉酶酶活力测定。
实验设备及耗材
1.实验设备超净台、灭菌锅、培养皿等;
2.实验试剂选择性淀粉固态培养基、LB淀粉培养基。
实验步骤:
1.淀粉酶产生菌的筛选培养基制备①培养基灭菌;②超净台无菌化处理;③倒平板。
2.淀粉酶产生菌的筛选、样品采集和预处理①土壤样品采集及称量;②土壤样品悬液制作;③土壤样品梯度稀释。
3.淀粉酶产生菌的筛选菌株筛选①选择土壤样品梯度稀释液;②涂布平板,样品培养;③滴加碘液,观测水解圈;④挑选水解圈菌落,划线纯化,LB液体培养基摇瓶振荡培养。
4.淀粉酶产生菌的筛选-淀粉标准曲线制作①乙酸-磷酸氢二钠柠檬酸-碘液混合液的配制;②不同浓度比色液配制;③分光光度计检测。
5.淀粉酶产生菌的筛选-淀粉酶活力测定①取试管保存菌液,摇瓶发酵扩培菌液;②取扩培菌液,离心去菌体,上清液配制酶活性测定溶液;③分光光度计法测定菌液酶活性,方法同实验
问答题:1.梯度稀释法的主要实验流程及需要注意的问题有哪些?
2.平板划线法的主要实验流程及需要注意的问题有哪些?
3.分光光度计的使用,空白液如何配制?