酪氨酸酶活性检测试剂盒（可见分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50T
产品简介：
酪氨酸酶（tyrosinase：EC1.14.18.1）是一种单酚单加氧酶，是具有双功能的含铜糖蛋白，广泛存在于植物、酵母和动物组织中。酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶，也是引起果蔬酶促褐变的主要因素，同时也对昆虫的免疫及生长有重要影响。
酪氨酸酶催化L-多巴生成多巴色素，其在nm下有特征吸收峰，进而测定出酪氨酸酶的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
溶液的配制：
1.试剂一：临用前每瓶加入15mL提取液充分溶解待用，现配现用。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2.细胞或细菌样本的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）。g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）：直接检测。
二、测定操作
1.分光光度计预热30min，波长调至nm。蒸馏水调零。
2.加样表（在1mL玻璃比色皿中分别加入）
充分混匀后立即测定10s时在nm下的吸光度，记为A1，之后迅速将其放入37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴或培养箱中3min。然后迅速拿出擦净后测定s时的吸光度，记为A2。计算ΔA=A2-A1。
三、酪氨酸酶酶活计算
1.按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。
酪氨酸酶（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷(V样×Cpr)÷T=90.09×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。
酪氨酸酶（U/g质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷(W÷V提取×V样)÷T=90.09×ΔA÷W
3.按细胞或细菌数量计算：
单位的定义：每个细胞或细菌每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。
酪氨酸酶（U/cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷(÷V提取×V样)÷T=0.18×ΔA
4.按血清（浆）体积计算：
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。
酪氨酸酶（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×÷V样÷T=90.09×ΔA
V反总：反应总体积，10-3L；ε：多巴色素的摩尔消光系数：3.7×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；：单位换算系数，1mol=nmol；V样：加入的样本体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V提取：提取液体积，1mL；：细胞或细菌总数，万；T：反应时间，3min。
注意事项：
1.当ΔA大于0.3时，建议将样本用提取液稀释后测量；ΔA过小时，建议增加酶促反应时间（5min或10min）或增加加入的样本体积来测定。
2.试剂一溶解后易氧化。溶解后尽快用完。
