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α-葡萄糖苷酶（α-GC）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的α-糖苷键生成葡萄糖，是纤维素分解酶系中重要组成成分之一，并且与细胞壁的松弛或加固、细胞识别和信号分子的产生密切相关。
α-葡萄糖苷酶能够分解对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，产物在nm处具有特征吸收峰，通过吸光值变化即可表征α-葡萄糖苷酶的活性。
α-葡萄糖苷酶活性检测原理
测定过程中所需要的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）
①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为（-）：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎（功率20%或W，超声3s，间隔10s，重复30次），4℃10g离心20min，取上清置于冰上待测。
②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：（5-10）的比例（建议称取0.2g组织，加入1mL提取液）处理样品，冰浴匀浆，4℃10g离心20min，取上清置于冰上待测。
③血清（浆）、培养液等液体样本：直接检测或适当稀释后再进行检测。
吸光值测定：取1mL反应液于1mL玻璃比色皿中，测定nm处吸光值，记为A测定、A对照、A标准和A空白；计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA标准=A标准-A空白。注：每个测定管均需设一个对照管，空白管只需测定1-2次。
标准曲线的建立：以、、50、25、12.5、6.25nmol/mL为横坐标（x），以其对应的ΔA标准为纵坐标（y）绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入公式中得到x（nmol/mL）。
注意事项
①若测定吸光值超出标准线性吸光值范围，可适当增加样本量或将粗酶液适当稀释后再进行测定，计算时相应修改；
②为保证结果准确且避免试剂损失，测定前请仔细阅读说明书（以实际收到说明书内容为准），确认试剂储存和准备是否充分，操作步骤是否清楚，且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定，过程中问题请您及时与工作人员联系。
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