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上次和大家分享了蛋白的提取的实验方法，那么拿到蛋白样品后，如何对其中的蛋白质进行定量呢？今天就给大家分享一下蛋白质定量的方法。
目前使用的蛋白质定量的方法主要有：Lowry法、考马斯亮蓝法（Bradford法）、BCA法、磺基水杨酸沉淀法等。今天先给大家介绍一下Lowry法。
Folin-酚法（Lowry法）最灵敏的蛋白质测定方法之一，最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。
实验原理碱性条件下，蛋白质中的肽键和铜结合生成蓝色复合物（双缩脲反应），接着加入福林酚试剂（Folin-PhenolReagent），其中的磷钼酸盐-磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，使得蓝色变为深蓝色，增加了显色量，进而提高了检测蛋白的敏感性，在一定条件下，蓝色深度与蛋白量成正比。
实验试剂1．试剂甲：碱性铜溶液
10gNa2CO3,0.25gKNaC4H4O6·4H2O和2gNaOH，溶解于ml双蒸水中。
0.5gCuSO4·5H2O溶解于ml双蒸水中。
每次使用前,将A与B以50:1混合，即为试剂甲。
2．试剂乙：福林酚试剂（2X）
3．牛血清蛋白（BSA）
4．待测的蛋白样品
实验步骤准备1X的福林酚试剂，将2X的福林酚试剂用双蒸水稀释至1X。（1X的福林酚试剂不够稳定，配置后应尽快使用）
配置不同浓度的标准蛋白液（BSA）,1ug/ul,2.5ug/ul,5ug/ul,7.5ug/ul,10ug/ul，待测蛋白样品在什么溶液中，就用该溶液来稀释标准蛋白液（如待测样品溶于强RIPA裂解液，则用强RIPA裂解液来稀释标准蛋白液）。
取各浓度的标准蛋白液40ul加入96孔板中，另取待测的蛋白样品40ul，加入96孔板。
向各孔的蛋白液中加入ul的试剂甲（碱性铜溶液），混匀，室温静置10分钟。（此处尽量用排枪加入试剂甲，保证反应时间相同）
静置结束后，用排枪向各孔中加入20ul的试剂乙，立即振荡混匀30s，接着室温放置30分钟。（该步骤混合速度要快，否则会使显色程度减弱）
用酶标仪测定波长nm处的吸光度，再将各个点的吸光度减去空白值，绘制标准曲线，从而计算待测样品的蛋白浓度。
如图，以标准液的蛋白质浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线，进而计算待测样品的蛋白浓度。
注意事项因反应产生的显色会不断地加深，所以各项操作的时间必须精确，如在加入试剂甲和试剂乙时，应尽量使用排枪，从而使得反应时间一致，如果没有排枪时，也应尽量控制混匀的时间点，使得反应时间尽量一致。另外，室温静置的时间应该尽量精确。
标准蛋白液的加量应当准确，如果加量不准确，会导致制作出来的标准曲线出现偏差，影响待测样品的浓度计算，所以一方面需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液，另一方面应使用精确度高的移液枪。
对于新手来说，加样前可以现在纸上记录下加样的顺序，以免出错。
由于Lowry法蛋白定量法的蛋白浓度和吸光度并不呈完全线性相关，绘制标准曲线的时候如果是机器绘制，那么应该选用four-parameter(quadratic)orbest-fitcurve，效果比purelylinearfit更好，如果是手工绘制，不应该选择linearfit（线性拟合），应该选择用电和电（pointtopointcurve）直接连线而成的曲线效果更好。
优缺点优点：
1.方法常用。
2.灵敏度高，较双缩脲法更灵敏。
缺点：
耗时较长
需要精确控制反应时间
标准曲线不是严格的直线形式
专一性较差，干扰物质较多
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