一些聚合酶在Mn2存在的情况下,虽然活

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●脱氧核糖核酸三磷酸盐(dNTP)。标准的PCR反应含有等摩尔数的dATP、dTTP、dCTP和dGTP，每种dNTP的推荐浓度是~umol/L，MgCl2的浓度为1.5mmol/L。在50μuL反应体系中，这个浓度足以合成6~6.5μg的DNA，即使对于含有8对以上引物的多重PCR反应来说也是足够的。dNTP低至20umol/L也能合成0.5~1.0pmol的1kb的DNA分子。但是，过高浓度的dNTP(大于4mmol/L)反而会抑制PCR反应，可能的原因是对Mg°的猝灭作用。多家公司(如Roche、QIAGEN、Boehringer-Ingelheim、GEHealthcareLifeSciences)均出售经过高压液相色谱(HPLC)纯化后的dNTP，以作为PCR反应的底物。这些dNTP中不含有能够抑制PCR反应的四磷酸盐及焦磷酸盐。储存的dNTP对反复冻融敏感，几次冻融后，PCR效率会下降。解决方法是将dNTP分装(2~5μL)在10mmol/L的Tris(pH8.0)中，保存于20C，在第二轮冻融后，就应该丢弃不用了。如果使用纯水溶解保存，容易造成dNTP的酸水解。在长期-20C保存中，水分会蒸发到管壁上，造成dNTP浓度的变化，此时应短暂离心。●二价阳离子。二价阳离子通常为Mg2,是所有的热稳定DNA聚合酶活性所必需的。一些聚合酶在Mn2+存在的情况下，虽然活性略低，但是也能工作。

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