酸性蛋白酶活性检测试剂盒(货号:AKPR)
酸性蛋白酶(ACP)是在酸性环境下作用于蛋白质肽键的一类蛋白酶,可将蛋白质水解为氨基酸、多肽以及游离氨基酸。酸性蛋白酶能够在低pH条件下有效水解蛋白质,在酒精发酵、食品加工、酿造、饲料添加、皮革加工等领域具有广泛应用。
酸性蛋白酶能够在酸性条件下,催化酪蛋白水解产生酪氨酸,酪氨酸在碱性条件下能够还原磷钼酸化合物生成钨蓝,产物在nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可表征酸性蛋白酶的活性。
酸性蛋白酶活性检测原理测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴/培养箱和蒸馏水。
1.粗酶液的制备(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①细菌或细胞:离心收集细菌或细胞至离心管内,按照细菌或细胞数量(10个):提取液体积(mL)为(-):1的比例(建议万个细菌或细胞加入1mL提取液)处理样品,冰浴超声破碎(功率W,超声3s,间隔7s,总时间3min),4℃g离心10min,取上清置于冰上待测。
②组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取0.1g组织,加入1mL提取液)处理样品,冰浴匀浆,4℃g离心10min,取上清置于冰上待测。
③血清、培养液等液体样本:直接测定或使用提取液适当稀释后再进行测定。
吸光值测定:取1mL反应液于1mL玻璃比色皿中,测定nm处吸光值,记为A测定、A对照、A标准和A空白;计算A测定=A测定-A对照,A标准=A标准-A空白。注:标准管和空白管只需测定1-2次,每个测定管均需设立一个对照管。
注意事项
①若A测定差值较小,可适当延长第一步反应时间(15-25min),计算时相应修改;
②为保证结果准确且避免试剂损失,测定前请仔细阅读说明书(以实际收到说明书内容为准),确认试剂储存和准备是否充分,操作步骤是否清楚,且务必取2-3个预期差异较大的样本进行预测定,过程中问题请您及时与工作人员联系。
ForResearchUseOnly.NotforUseinDiagnosticProcedures.