#LNP递送系统#
注：本文不构成任何投资意见和建议，以官方/公司公告为准；本文仅作医疗健康相关药物介绍，非治疗方案推荐（若涉及），不代表耀海生物立场。任何文章转载需得到授权。
前言
工艺技术开发是研究工业中用于大规模生产生物产品的各种生物技术过程，以优化最终产品的产量和质量。所以工艺技术开发在工艺生产中占据着极重要的作用，工艺技术的稳定性和可靠性决定了产物的合格率，由此可见工艺技术开发在生物工程中的重要性。
在新冠疫情中，各类mRNA疫苗纷纷采用了LNP技术作为递送载体，可有效避免核酸被降解，提高mRNA进入细胞的效率，进而提高疫苗的功效。所以，如何提升LNP-mRNA包封率、如何准确检验包封率等成为近来研究的热门话题。
接下来菌菌将通过解读VictoriaL.Singer在AnalyticalBiochemistry发表文章《RNAQuantitationbyFluorescence-BasedSolutionAssay:RiboGreenReagentCharacterization》，带大家了解RiboGreen染料检测RNA浓度法的前世今生。在已经有了LPN作为脂质载体给药系统中的重要技术后，还需要有优秀的试剂来对mRNA的包封提供有力支持，这次我们着重探讨的是利用RiboGreen检测包封率。
星耀小TIP：
脂质纳米颗粒（Lipidnanoparticles，LNPs）是脂质载体给药系统中的重要技术之一，已成为基于寡核苷酸治疗药物的一个重要进展。封装在脂质纳米颗粒中的寡核苷酸在传递过程中受到保护，不受酶降解，并有效地传递到细胞中，在细胞中载体颗粒中的内容物被释放并被翻译为治疗蛋白，可见LNPs对基于寡核苷酸的治疗具有巨大的革命性潜力。
RioGreen检测RNA含量的优势
年，VictoriaL.Singer在AnalyticalBiochemistry发表文章《RNAQuantitationbyFluorescence-BasedSolutionAssay:RiboGreenReagentCharacterization》，首次使用RiboGreen染料来检测RNA浓度。RiboGreen是一种用于定量检测溶液中RNA含量的超敏感荧光核酸染料，检测下限可以低至1ng/ml，使用96孔板检测时，每孔ul样品中可以检测到pgRNA。RiboGreen检测的RNA线性浓度范围可以跨越3个数量级，从1ng/ml到1ug/ml，并且不会受到样品中存在的蛋白、盐、洗脱剂、乙醇、琼脂糖等杂质的干扰。此外，RiboGreen也可以同样品中的DNA结合，为了消除RiboGreen结合到DNA上产生的荧光信号，在样品中可以加入DNaseI消除样品中存在的DNA。
当RiboGreen荧光染料处于溶液状态时，其几乎没有荧光活性;当RiboGreen与RNA结合，其荧光活性将增加倍。RiboGreen-RNA复合物的荧光激发波长约nm，发射波长约nm。使用RiboGreen荧光染料可以检测到2.5ng/ml的RNA，比nm吸收法要高出千倍。
图1Moderna公司利用RiboGreen检测LNP包封率
一、为什么我们需要定量检测RNA含量？
确定精确的剂量（accuratedosing）
LNP-RNA制备过程就像是“包饺子”，RNA是“馅”，“包子皮”是LNP，只有知道每个饺子皮包多少克馅，才能知道给病人需要喂几个饺子。在体外试验或者体内治疗时，精确的剂量是非常重要的，因此，我们必需要知道纳米脂质颗粒内部的RNA含量。
包封效率（encapsulationefficiency）
包封率是LNP-RNA非常关键的指标，表示包裹在脂质纳米颗粒内部的RNA占全部RNA的比例。如果LNP-RNA生物学活性很低，那原因可能是多方面的，但是如果可以知道纳米脂质颗粒内部包封的RNA含量是正常的，就可以排除制剂包封过程出现问题。通过包封率的检测，不仅可以摸索LNP配方和包封参数，也能够监测LNP-RNA稳定性随时间发生的改变。
星耀小TIP：
脂质纳米粒广泛用于小分子和核酸药物的递送，近年来因其作为COVID-19mRNA疫苗递送平台的巨大成功而备受
