酶联免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以简单地回答样本中有多少蛋白质、多肽、抗体这一基本问题，是实验室比较常用的一种检测方法。
而这种简单的分析方法的核心，就是标准曲线。没有它，我们的实验就变成了一个二元的“是/不是”测试。有了它，我们可以深入研究生物反应的细节。
有多少人对ELISA标准曲线拟合头痛？！实际上，不只是ELISA标准曲线拟合，其它各种有关的实验数据分析，都可以应用ELISACalc进行数据分析。下面就跟随小编，看看怎么四步轻松搞定ELISA标准曲线制作与数据计算！
第一步
在Excel表格中输入浓度和OD值
第二步
粘贴”数字部分贴入ELISACalc
第三步
选择回归/拟合模型
拟合方式介绍
直线回归（常用）
二次曲线回归（常用）
三次曲线回归
Logit-log直线回归
Logistic曲线拟合1
Logistic(四参数)（常用）
Logistic(五参数)
Hill曲线拟合
指数曲线拟合
三次样条插值
是否扣本底？是否取对数？
原则1.很多Kit可以同时用多种方式进行拟合；
2.除了试剂盒推荐的拟合方式，其他的拟合方式也可以尝试；
3.双抗夹心法可以选择直线，二次，四参数三种；可以直接拟合，也可以采用扣除O孔本底后取对数的方式；
4.取单数可以采用单对数，或者双对数法都可以；单对数就是X值（浓度值取对数）；
5.Logit-log的拟合方法是用于竞争法的；竞争法也可以用四参数或者五参数的方式进行拟合。
点击“回归/拟合”
拟合结果判断
先采用线性拟合，因为OD值超过2.0后，用线性不好。可以点击“数据输入”改用：二次曲线法或者四参数；或者扣本底的直线回归，二次曲线法或者四参数；
扣本底的做法：
扣本底，对数的选择方式
点击“回归方程”可以复制后粘贴到其他的文件中。
方程拟合的好坏，还可以查看方程来检验，主要看r^2的值，越接近1，拟合效果越好。
第四步
由Y计算Ｘ
1、从Excel表粘贴样品反应值数据，点击“粘贴”；
2、点击“计算”；
3、得到数据；
4、点击“复制”，然后可以粘贴到Excel中，得到计算后的数据
需注意的问题
1、二次曲线计算的结果会有两个解，要舍掉其中一个偏离度大的。
2、Log-logit的拟合方法是用于竞争法的，竞争法也可以用四参数或五参数的方式进行拟合。
3、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。
4、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段，即曲线几乎成直线的范围内。
5、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，ELISA试剂盒这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
6、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。
7、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。
8、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.。
要想绘制出合格的标准曲线、使用好标准曲线，真心不易，必须将各个方面的条件都考虑进去，即对标准曲线的绘制也实行质量控制，只有这样,才能得出理想的标准曲线。
“工欲善其事，必先利其器”这么好用的标曲绘制软件是不是也应该入手一个？！
