黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
XOD（EC1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD主要分布于哺乳动物的心、肺、肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。
XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在nm下有特征吸收峰。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
产品内容：
溶液的配制：
1.试剂二：粉剂置于试剂瓶内EP管中；
2.工作液的配制：用时在试剂二中加入9.mL试剂一充分溶解，用不完的试剂4℃可保存2周；按需用蒸馏水稀释10倍后备用，现用现配。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、匀浆器/研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1.细菌、细胞或组织样本的制备：
细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或W，超声3s，间隔10s，重复30次）；g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。或者直接用0.5mg/mL的酶液直接测定，为保证实验准确性建议用提取液梯度稀释后测定。
2.血清（浆）样本：直接检测。
二、测定操作
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2.测定前按需取出一定量的XOD检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）水浴20min以上：
3.空白管：取1mLXOD检测工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL蒸馏水，混匀，立即测定nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，计算ΔA空白=A2-A1。
4.测定管：取1mLXOD检测工作液于1mL石英比色皿中，再加入35μL样本，混匀，立即测定nm下的初始吸光值A3和1min后的吸光值A4，计算ΔA测定=A4-A3。
三、XOD活性计算
1.血清（浆）XOD计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生1μmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mL）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×]÷V样÷T=2.×ΔA
2.组织、细菌或细胞中XOD计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/mgprot）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×]÷(V样×Cpr)÷T=2.×ΔA÷Cpr
（2）按样本质量计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1μmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/g质量）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×]÷（W×V样÷V样总）÷T=2.×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生1μmol尿酸定义为一个酶活力单位。
XOD（U/cell）=[(ΔA测定-ΔA空白)×V反总÷（ε×d）×]÷（×V样÷V样总）÷T=4.×10-3×ΔA
V反总：反应体系总体积，1.×10-3L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；：细胞或细菌总数，万；：单位换算系数，1mol=μmol。
注意事项：
1.当ΔA测定大于0.4或者A3大于1.1时建议用提取液稀释样本后进行测定。
