做了5年的MTT实验，耗费了上万块96孔板。有成功的喜悦，有失败的沮丧，有好多话要对各位实验同仁说。在这之前，我们先回顾一下MTT的原理及操作步骤。
实验原理
MTT是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下，生成蓝色的formazan结晶。
formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原，无法形成结晶），且该结晶溶解于DMSO。
利用酶标仪测定波长nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
实验步骤
1.接种细胞：用含10%胎牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔合适的细胞数量接种到96孔板，每孔体积ul。
2.培养细胞：同一般培养条件，可根据试验目的和要求决定培养时间。
3.呈色：每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS缓冲液pH=7.4配制）20ul。继续孵育4小时，终止培养，小心弃去孔内培养上清液，对于悬浮细胞，需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加ulDMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4.比色：选择nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果。
个人心得体会
1.细胞消化、接种数量：注意消化和数量，消化和数量，消化和数量（重要的事情说三遍）。从我个人的实验经验来看，这是重中之重。
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