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位点找不准一周都白忙酶切不妨换个

发布时间:2022-2-23 17:03:34   点击数:
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经常做分子克隆实验的小伙伴们一定知道,在经典分子克隆中,将目标片段插入载体全靠内切酶的拆分和连接酶的连接。选择合适的酶切位点非常重要,要注意不能破坏目标基因及载体的完整性,同时要尽量避免两个酶切生成的粘端一样。

做实验,有时真需要一点运气。

但好运不常有,要找到合适的酶切位点就跟遇到合适的爱情一样,可遇不可求。那么就真的没有办法解决这些问题么?随着技术不断发展,无缝克隆技术应运而生,可以通过PCR扩增得到目标片段和线性化载体对应的末端同源,用特定外切核酸酶消化末端数个碱基得到黏性末端,两者互补结合——全程不会加入额外碱基,搭配可实现高精度扩增的高保真DNA聚合酶,更是强强联手,教你分分钟玩转分子克隆!

GibsonAssemblyHiFi预混液组装示意图

GibsonAssemblyEX预混液组装示意图

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