碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒（抑制敏感法）
产品货号：BA
产品规格：T
产品简介：
碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。碱性磷酸酶同工酶有肝、骨、小肠、胎盘、胆汁等同工酶。
碱性磷酸酶同工酶检测试剂盒(抑制敏感法)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过比色法(分光光度计或酶标仪)测定nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出总的碱性磷酸酶活性水平。同时通过56℃、65℃
加热后测定残余ALP活性，以确定同工酶的性质。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。如果用分光光度计，T的检测试剂盒可检测33次左右；如果用酶标仪，T的检测试剂盒可检测次左右。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成
自备材料：
1.离心管或96孔板
2.水浴锅或恒温箱
3.分光光度计或酶标仪
操作步骤(仅供参考)：
1.配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取溶解于ddHO，使浓度达到，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml）按照下表稀释系列标准品溶液。
2.准备样品：
①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释后检测。
3.使用分光光度计检测：
检测总ALP：按照下表设置对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测测最好能设置平行管。
用分光光度计，以对照管(ddH2O)调零，读取对照管、标准管、尿素测定管、苯丙测定管、总测定管的吸光度(即A对照A标准、A测定)，如无法检测，亦可检测范围内吸光度，一般应数小时内检测完毕。
4.使用酶标仪检测:
检测总ALP：按照下表设置对照孔、标准孔、尿素测定孔、苯丙测定孔、总测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。
用酶标仪，以0号孔(ddH2O)调零，读取对照孔、标准孔、尿素测定孔、苯丙测定孔、总测定孔的吸光度(即A对照、A标准、A测定)，如无法检测，亦可检测范围内吸光度，一般应数小时内检测完毕。
计算：
碱性磷酸酶金氏活性单位的定义：在37℃条件下ml待测样品与显色底物(即ALP显色液所含物质)作用15min，产生1mg酚为一个金氏单位(U/L)。
以系列Phenol标准(1~5号管)对应的金氏单位为x轴，以相应的A标准(1~5号管)为y轴，绘制标准曲线，亦可分别制作标准曲线。以A测定-A对照的差值为实际的吸光度，用该差值与标准曲线进行对比，求出总ALP、尿素抑制、苯丙抑制ALP活性单位。
尿素抑制ALP残余活性百分率=（尿素抑制ALP残余活性×2）/总ALP活性×%
苯丙抑制ALP残余活性百分率=（苯丙抑制ALP残余活性×2）/总ALP活性×%
参考区间：
抑制ALP残余活性百分率
注意事项:
1.待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2.如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
3.所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。
4.空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。
5.加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
