TaqDNA聚合酶的非特异扩增是PCR实验中的常见问题，非特异扩增直接影响检测结果的判读并且会导致扩增灵敏度下降，甚至目标片段的得率下降等。利用酶修饰剂在常温下封闭TaqDNA聚合酶酶活中心，抑制常温下Taq酶的DNA聚合酶活性，是目前最有效抑制非特异性扩增的方式。翌圣开发的双封闭抗体，不仅可以封闭TaqDNA聚合酶的聚合酶活性，还能同时封闭TaqDNA聚合酶的外切酶活性，双管齐下，既能有效防止错配或引物二聚体引起的非特异性扩增，又能防止物料降解产生非特异信号，双重提升试剂特异性，使检测试剂在运输或室温使用过程中都能够从容应对。
图1.Yeasen双封闭热启动Taq酶抗体产品
注：产品专利号-CN.7
产品特点超强扩增特异性——双封闭抗体可在低温时同时封闭聚合酶和外切酶活性，能有效避免非特异性扩增，提高扩增特异性
卓越检测灵敏度——热启动形式增加了引物与微量的正确模板碰撞退火的效率，从而可保证低丰度基因有效检出，灵敏度更高
优秀产品稳定性——37℃放置5天、4℃放置10天性能稳定
基线平稳线性好——解决了基线上漂问题，线性好
酶活释放速度快——95℃下加热20s即可释放95%以上酶活
酶类适用范围广——野生型和突变型Taq酶均适用，每mg抗体可封闭4-10KUTaq酶（针对不同类型的Taq酶略有不同）
产品性能01TaqDNA聚合酶外切酶活性验证将合成的引物探针分别配于未封闭以及双封闭抗体封闭的TaqDNA聚合酶的反应液中，40℃反应，检测两者荧光信号，发现双封闭抗体可有效封闭TaqDNA聚合酶的外切酶活性。
图2.双封闭抗体外切酶活性封闭效率检测
02检测灵敏度验证分别用翌圣双封闭抗体以及T公司抗体对Taq酶封闭后通过ARMS-PCR技术检测阳性样本，发现翌圣双封闭抗体封闭的Taq酶在ARMS-PCR扩增中分型准确，灵敏度更高。
图3.ARMS-PCR扩增曲线图
03稳定性验证（4℃-10天、37℃-5天）用传统封闭抗体与双封闭抗体分别封闭TaqDNA聚合酶，配置成含引物探针的全预混液，在4℃放置10天或在37℃放置1、3、5天，扩增拷贝ASF质粒，发现扩增曲线和Ct值无明显变化。
图4.4℃传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增拷贝ASF质粒扩增曲线图
图5.37℃传统封闭抗体(A)、双封闭抗体(B)封闭反应液扩增拷贝ASF质粒扩增曲线图
04基线检测某些引物配合特定buffer和仪器时，会出现基线上漂的情况，但双封闭抗体能解决基线上漂问题，更有利于基线平稳。
图6.N基因(A)、ACT基因(B)扩增曲线图
05线性验证用双封闭抗体封闭的反应液扩增0、、、拷贝ASFV/ACT双质粒，制作标准曲线。由图7可以看到，两者线性均良好。
图7.双封闭反应液制作ASFV基因、ACT基因标准曲线图
06酶活释放检测分别用进口T公司抗体和翌圣双封闭抗体（Cat#）封闭Taq酶，并在95℃下热激20s，检测酶活。可以看到95℃热激20s后，可释放95%以上的酶活，与T公司抗体相当。
表1.95℃下热激20s酶活
07多类型Taq酶检测翌圣双封闭抗体（Cat#）分别封闭三种类型Taq酶（野生型+2种突变型），封闭比例为1μg:5U，测量荧光值以及封闭效率。发现对于不同类型的Taq酶，翌圣双封闭抗体（Cat#）封闭效果均较好。
表2.不同类型Taq酶的封闭效率
08小鼠基因组残留检验以水为模板作为阴性对照，小鼠基因组为模板作为阳性对照，扩增不同批次的，观察条带，发现样品未扩增出目的片段，说明抗体不存在小鼠基因组残留。
图8小鼠基因组残留检测图
注：-为阴性对照，+为阳性对照，1-5为不同批次样品
