过氧化氢酶(CAT)是一种酶类清除剂,又称为触酶,是以铁卟啉为辅基的结合酶。它广泛存在于已知的动物的各个组织中,特别是在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶,约占过氧化物酶体酶总量的40%。
过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢,它也被用于食品包装,防止食物被氧化。
此外,过氧化氢酶在植物中也发挥着重要的作用。它能够催化过氧化氢分解成氧和水,从而保护植物免受过氧化物的损害。在农业生产中,通过基因工程等方法提高植物过氧化氢酶的活性,可以增强植物的抗逆性和适应性,提高作物的产量和品质。
检测原理:
H2O2在nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
操作步骤可参考:
取克剪碎叶片于预冷研钵中,加入5ml的提取介质L的磷酸缓冲液(含1%PVP)(先加3ml研磨,再加2ml冲洗研钵),研磨匀浆,转入离心管后于冰箱中冷提12h。r/min离心20min,得到酶初提液。
取mlPBS,加入30%的H2O2(原液)摇匀即可。
取3ml反应液加入(可视情况调整)酶液,以PBS为对照调零,测定OD(紫外)。(测定30s读数一次,5分钟)。
酶活性计算:以每minOD值减少为1个酶活性单位(u)。
CAT=[ΔA×Vt]/(W×Vs××t)(u/gmin)
ΔA:为反应时间内吸光度的变化;W为样品鲜重(g);t为反应时间(min);Vt为提取酶液总体积(ml,);Vs为测定时取用酶液体积(ml,)。